Подготовка биологического материала для молекулярно-генетических идентификационных исследований при массовом поступлении неопознанных тел
Иванов П.Л., Корниенко И.В., Водолажский Д.И., Вейко В.П., Щербаков В.В.
Раздел: Судебная медицина

В книге рассмотрены вопросы пробоподготовки объектов биологического происхождения для молекулярно-генетической идентификации личности. Подробно описаны основные методы выделения ДНК, которые используются в лабораторной практике 124 Центральной Лаборатории Медико-Криминалистической Идентификации Министерства Обороны Российской Федерации.
Предназначена для экспертов-биологов и молекулярных генетиков экспертно-криминалистических подразделений Министерства Обороны и органов внутренних дел.

--- СОДЕРЖАНИЕ ---

ВВЕДЕНИЕ

Организация сбора, транспортировки и хранения образцов, предназначенных для ДНК-идентификации личности в условиях массового поступления неопознанных тел
Основные этапы процедуры ДНК-типирования
Сбор образцов биологических тканей
Инструкция по сбору образцов крови для генетического анализа с использованием комплекта FITZCO/FTA Gene Guard system
Организация работы групп по сбору биологических образцов
Меры по предотвращению контаминации при отборе биологических образцов
Обеспечение качества и аутентичности биологических образцов
Требования, предъявляемые к образцам
Транспортировка биологического материала
График режимов перевозки замороженных образцов
Хранение биологических образцов в депозитарии
Организация приемки биологических проб
Организация хранения поступивших в депозитарий биологических образцов
Хранение образцов выделенной ДНК
Факторы, влияющие на хранение нуклеиновых кислот
Компьютерное обеспечение учета биологического материала
Выдача биологических образцов или выделенной ДНК для аналитических работ
Методы экстракции ДНК
Подготовка рабочего места и инструментария
Потери ДНК при выделении методом органической экстракции

I. МЕТОДЫ РАБОТЫ С КРОВЬЮ
1. Сбор и хранение крови на FTA Gene Guard системе
2. Очистка ДНК, иммобилизованной на FTA Gene Guard системе, от ингибиторов ПЦР
3. Выделение ДНК, иммобилизованной на FTA Gene Guard системе с помощью ионообменной смолы Chelex 100 и протеиназы К
4. Выделение ДНК из пятен крови с помощью ионообменной смолы Chelex 100
5. Выделение ДНК из жидкой крови методом экстракции органическими реагентами
6. Выделение ДНК из крови методом экстракции органическими реагентами
7. Выделение ДНК из пятен крови методом экстракции органическими реагентами
8. Выделение ДНК из жидкой крови методом нуклеосорбции

II. МЕТОДЫ РАБОТЫ С КОСТНОЙ ТКАНЬЮ
9. Выделение ДНК из костной ткани методом органической экстракции
10. Выделение ДНК из декальцинированной костной ткани методом органической экстракции
11. Выделение ДНК из тканей зуба методом экстракции органическими реагентами

III. ЭКСТРАКЦИЯ ДНК ИЗ НОГТЕВОЙ ПЛАСТИНКИ И ВОЛОСА
12. Выделение ДНК из ногтевой пластинки методом органической экстракции
13. Выделение ДНК из волоса методом экстракции органическими реагентами
14. Выделение ДНК из волоса с помощью ионообменной смолы Chelex 100 и протеиназы К

IV. МЕТОДЫ ВЫДЕЛЕНИЯ ДНК ИЗ ФРАГМЕНТОВ ХРЯЩА, СУХОЖИЛИЙ И МЯГКИХ ТКАНЕЙ
15. Выделение ДНК из фрагментов сухожилий, хряща и мягких тканей методом экстракции органическими реагентами
16. Выделение ДНК из мягких тканей с помощью ионообменной смолы Chelex 100
17. Выделение ДНК из мягких тканей с помощью ионообменной смолы Chelex 100 и протеиназы К
18. Экстракция ДНК из различных биологических источников с помощью набора PROTRANS Forensic Kit I
19. Концентрирование и очистка экстрактов ДНК при помощи устройства «Centricon 100»

V. ВЫДЕЛЕНИЕ ДНК ИЗ ФИКСИРОВАННЫХ ТКАНЕЙ
20. Депарафинирование фрагментов тканей
21. Выделение ДНК из депарафинированных тканей

VI. КАЧЕСТВЕННАЯ И КОЛИЧЕСТВЕННАЯ ОЦЕНКА ВЫДЕЛЕННОЙ ДНК
22. Спектрофотометрическая детекция нуклеиновых кислот
23. Количественная оценка выделенной ДНК на флуориметре Hoefer DyNA QuantTM 200
23. Количественное определение ДНК человека в растворе с помощью тест-набора QuantiBlot® Human DNA Quantitation Kit
24. Оценка качества ДНК при помощи электрофореза в агарозном геле
25. Фотодокументирование результатов электрофореза в агарозном геле

Приложение 1
Меры предосторожности при работе с биологическим материалом
Приложение 2
Оборудование, необходимое для экстракции ДНК
Приложение 3
Реагенты для экстракции ДНК
Приложение 4
Растворы для экстракции и анализа выделенной ДНК
Приложение 5
Меры безопасности при работе с опасными химическими реактивами
Приложение 6
Хранение реактивов